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Tuesday, May 21, 2013

Exocytosis in Bovine Chromaffin Cells




ABSTRACT        In response to physiological stimuli, neuroendocrine cells secrete neurotransmitters through a Ca2   -dependent
fusion of secretory granules with the plasma membrane. We studied insertion of granules in bovine chromaffin cells using
capacitance  as  a  measure  of  plasma  membrane  area  and  fluorescence  of  a  membrane  marker  FM1-43  as  a  measure  of
exocytosis. Intracellular dialysis with [Ca2   ] (1.5–100   M) evoked massive exocytosis that was sufficient to double plasma
membrane area but did not swell cells. In principle, in the absence of endocytosis, the addition of granule membrane would
be  anticipated  to  produce  similar  increases  in  the  capacitance  and  FM1-43  fluorescence  responses.  However,  when
endocytosis  was  minimal,  the  changes  in  capacitance  were  markedly  larger  than  the  corresponding  changes  in  FM1-43
fluorescence. Moreover, the apparent differences between capacitance and FM1-43 fluorescence changes increased with
larger  exocytic  responses,  as  more  granules  fused  with  the  plasma  membrane.  In  experiments  in  which  exocytosis  was
suppressed, increasing membrane tension by osmotically induced cell swelling increased FM1-43 fluorescence, suggesting
that  FM1-43  fluorescence  is  sensitive  to  changes  in  the  membrane  tension.  Thus,  increasing  membrane  area  through
exocytosis does not swell chromaffin cells but may decrease membrane tension.

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